Testes cruzados: para que servem, técnica e fundação, fases

Os testes cruzados são uma série de estudos de laboratório que são realizados para determinar se os produtos sangüíneos de um doador (principalmente sangue total e concentrado globular) são compatíveis com o sangue do receptor.

É um teste complementar, além da compatibilidade ABO e do fator Rh. A razão para o teste cruzado é que, às vezes, dois indivíduos (doador-receptor) podem ter o mesmo grupo ABO e Rh, mas seu sangue ainda é incompatível.

Tal incompatibilidade é devida à presença de anticorpos contra uma série de proteínas de glóbulos vermelhos conhecidas como antígenos menores. Estes antígenos não são avaliados rotineiramente como é feito com o grupo sanguíneo (ABO) e fator Rh.

Isso ocorre porque os antígenos menores são muito menos frequentes e têm uma expressão variável em cada indivíduo, portanto é praticamente impossível agrupá-los em categorias, como é feito com o grupo e o fator Rh.

Em vez disso, os glóbulos vermelhos do doador são misturados com o soro do paciente (teste de compatibilidade principal) e os glóbulos vermelhos do paciente com soro doador (teste de compatibilidade menor) para detectar a presença de reações antígeno-anticorpo.

Quando existem anticorpos contra antígenos menores, seja no soro do paciente ou do doador, o teste é considerado positivo, portanto, na maioria dos casos, essa unidade particular de sangue não pode ser transfundida.

Grupo ABO

Para entender bem que reações cruzadas são tratadas primeiro, é necessário conhecer o básico sobre grupos sanguíneos.

Nesse sentido, o mais importante é saber que o sangue pode ser classificado em quatro grupos: A, B, AB e O.

Cada um desses grupos expressa na superfície dos glóbulos vermelhos uma determinada proteína (antígeno), que é identificada como um elemento estranho pelos anticorpos de um receptor potencial de um grupo diferente.

A mais notável das reações antígeno-anticorpo na compatibilidade do sangue é que nenhuma exposição prévia ao antígeno é necessária para a existência de anticorpos. Isso é conhecido como anticorpos naturais.

Anticorpos naturais

Geralmente, para que os anticorpos existam no corpo de um indivíduo, é necessário que as células brancas do sangue tenham sido previamente expostas ao antígeno.

Isto significa que no primeiro contato entre o antígeno estranho e o organismo não há anticorpos, pois estes são gerados mais tarde, após o contato inicial. Portanto, é impossível para o sistema imunológico ter anticorpos contra, por exemplo, um vírus em particular, caso não tenha sido exposto a ele no passado.

A única exceção ao acima é o anti-antígeno AB. Nestes casos, a pessoa tem anticorpos contra o antígeno que seus glóbulos vermelhos não têm, mesmo que nunca tenham estado em contato com os glóbulos vermelhos de outra pessoa. Isso é conhecido como anticorpos naturais.

Antígenos e anticorpos relacionados ao grupo sanguíneo

Os grupos sanguíneos são determinados no caso do sistema ABO pela presença de antígenos específicos (A ou B) na membrana das hemácias e, em contraste, anticorpos contra o antígeno ausente na membrana eritrocitária.

Assim, uma pessoa com grupo sanguíneo A expressa o antígeno A na superfície de seus glóbulos vermelhos, enquanto no soro há anticorpos anti-B.

Pelo contrário, em pacientes do grupo B, o antígeno B é encontrado, enquanto os anticorpos são anti-A.

Agora, os pacientes com sangue AB têm antígenos A e B. Portanto, não há anticorpos, pois isso destruiria os glóbulos vermelhos da pessoa.

O oposto ocorre no grupo O, onde a membrana eritrocitária não apresenta nenhum dos dois antígenos (nem A nem B), enquanto no soro existem anticorpos anti-A e anti-B.

Incompatibilidade do grupo ABO

Do exposto acima, a compatibilidade dos grupos sanguíneos ABO pode ser facilmente deduzida, uma vez que o antígeno da membrana eritrocitária é automaticamente conhecido como anticorpos no soro. Assim pois:

- O sangue A é compatível com o grupo A e o grupo O.

- O grupo sanguíneo B é compatível com sangue B e O.

- As pessoas com o grupo O só podem receber sangue O (uma vez que têm anticorpos anti-A e anti-B), embora seu sangue seja recebido por todos os outros grupos sem problemas, uma vez que não possui antígenos.

Finalmente. Aqueles que têm grupo sanguíneo AB podem receber sangue de todos os outros grupos (A, B, O e, claro, AB), uma vez que não possuem anticorpos contra qualquer um dos antígenos. No entanto, apenas pessoas AB podem receber sangue AB, uma vez que todos os outros grupos têm anticorpos que destruiriam esses glóbulos vermelhos.

Antígenos menores

Assim como os grupos ABO, uma série de proteínas que funcionam como antígenos pode ser encontrada na superfície dos eritrócitos, como é o caso dos antígenos do grupo ABO.

No entanto, esses antígenos não ocorrem em todos os indivíduos. Sua combinação é heterogênea e a penetrância (nível de expressão da proteína) é variável, portanto é impossível classificá-la em grupos como o que existe para ABO e Rh. De lá, deriva seu nome de "antígenos menores", também conhecidos como "antígenos de baixa incidência".

Embora não sejam frequentes, pode haver anticorpos naturais contra antígenos menores. Entre eles, os mais comuns são Lewis, MNSs, anti-N, Kell, Duffy, anti Fyb e Kidd. Todos eles responsáveis ​​por reações hemolíticas e pós-transfusionais muito graves.

Além disso, pode haver casos de sensibilização contra antígenos menores por contato prévio, seja com as referidas proteínas antigênicas devido a transfusões prévias ou devido à imunidade cruzada.

Imunidade cruzada

Diz-se que há imunidade cruzada quando dois antígenos de duas fontes diferentes (por exemplo, um glóbulo vermelho e uma bactéria) são muito semelhantes, a tal ponto que os anticorpos contra uma das referidas proteínas antigênicas também reagem com o outro porque são quase idênticos. .

Para entender melhor, tome o exemplo hipotético anterior (antígenos de um glóbulo vermelho e bactérias). Em nenhum dos casos existem anticorpos naturais, mas se uma pessoa for exposta às bactérias, elas gerarão anticorpos contra ela.

Tais anticorpos reagirão mais tarde contra um glóbulo vermelho se os antígenos deste forem muito semelhantes aos das bactérias que induzem a formação dos anticorpos.

Se isso acontecer, os glóbulos vermelhos com essa proteína antigênica em particular não podem ser administrados à pessoa que tem os anticorpos, pois haveria rejeição. Aqui reside a importância das reações cruzadas.

Quais são os testes cruzados para?

Desde que é impossível caracterizar o sangue de indivíduos diferentes em grupos com base nos antigenes menores, a única maneira de saber se no sangue de uma pessoa há anticorpos contra os antigenes menores das células vermelhas do sangue de outro é por meio dos testes cruzados .

Nos casos em que os anticorpos estão presentes, é desencadeada uma reação de hemólise ou aglutinação; portanto, conclui-se que a reação foi positiva; isto é, existem anticorpos contra antígenos menores (embora não se saiba exatamente o quê). Caso contrário, o teste é negativo.

Fundação

Os testes cruzados são baseados na reação antígeno-anticorpo. Portanto, com eles é possível detectar se no soro de um receptor existem anticorpos contra os antígenos dos glóbulos vermelhos do doador (ou vice-versa) induzindo uma reação antígeno-anticorpo.

Se não houver anticorpos, nenhuma reação ocorre e o teste é relatado como negativo. Por outro lado, se a reação for positiva (há hemólise ou aglutinação durante o teste), pode-se concluir que os anticorpos estão presentes.

A este respeito, é importante notar que pode haver anticorpos contra os glóbulos vermelhos no soro do doador e do receptor. Esta é a razão pela qual existem dois tipos de reações cruzadas.

Tipos de reações cruzadas

É possível que existam anticorpos contra eritrócitos doadores no soro do paciente; mas o oposto também pode ser verdadeiro, isto é, anticorpos no soro do doador contra os glóbulos vermelhos do paciente.

É por isso que existem dois tipos de testes cruzados:

- Maior teste cruzado.

- Teste cruzado menor.

Ambos os tipos são realizados rotineiramente no banco de sangue antes da transfusão de hemoderivados, uma vez que, se algum dos testes for positivo, existe um alto risco de reações transfusionais que podem colocar em risco a vida do paciente.

Maior teste cruzado

Neste teste, avalia-se se existem anticorpos contra os glóbulos vermelhos do dador no soro do receptor.

Se isso acontecer, os produtos sanguíneos não podem ser administrados, uma vez que um grande número de anticorpos presentes no plasma do paciente destruirá muito rapidamente os glóbulos vermelhos do doador, gerando reações catastróficas no corpo do receptor no processo. Essas reações são tão severas que podem ameaçar sua vida.

Pequeno teste cruzado

Neste caso, é determinado se existem anticorpos no soro do doador contra os glóbulos vermelhos do receptor.

Se assim for, os anticorpos começarão a destruir os eritrócitos do receptor. No entanto, uma vez que a quantidade de anticorpos é limitada, a reação é de menor intensidade; embora ainda seja perigoso.

Fases

Os testes cruzados maiores e menores são divididos em três fases:

Salina.

- térmica ou incubação.

- Coombs

Na primeira fase, os glóbulos vermelhos e o soro são misturados em solução salina. Em seguida, adiciona-se albumina e a amostra é incubada a 37º C por 30 minutos para finalmente prosseguir com a fase de coombes.

Técnica

A técnica do teste cruzado é relativamente simples, pois envolve a adição de glóbulos vermelhos doadores ao soro do paciente (teste cruzado maior), bem como eritrócitos receptores ao soro do doador (teste cruzado menor).

Para induzir a reação antígeno-anticorpo em um tempo relativamente curto, uma série de etapas padronizadas deve ser seguida. Essas etapas são resumidas de maneira simplificada abaixo.

É importante ter em mente que na seção seguinte o maior teste de compatibilidade é descrito, embora os passos sejam os mesmos para o teste de compatibilidade menor, mas trocando a origem dos glóbulos vermelhos e do soro.

Fase Salina

- Adicione a um tubo de ensaio 2 gotas de soro do receptor (do doador, se for o menor teste cruzado).

- Colher uma amostra de glóbulos vermelhos do doador (do receptor se for o menor teste cruzado).

- Lave e centrifugue os glóbulos vermelhos.

- Ressuspender em uma solução entre 3% e 5%.

- Coloque uma gota desta solução no tubo contendo o soro do recipiente.

- Misture delicadamente.

- Centrifugadora

- Leia o resultado na lâmpada do visor.

Fase Térmica

- Adicione 2 gotas de albumina a 22% ao tubo onde a fase salina foi concluída.

- Incubar a 37ºC por 30 minutos.

- Centrifugue por 15 segundos.

- Leia o resultado na lâmpada do visor.

Fase de Coombs

- Retire as células do tubo e lave-as com soro fisiológico.

- Remova o sobrenadante.

- Adicione duas gotas de reagente de Coombs.

- Misture delicadamente.

- Centrifugue de 15 a 30 segundos.

- Ressuspender as células e avaliar na lâmpada de visualização em busca de aglutinação ou hemólise.

Se houver aglutinação ou hemólise em qualquer uma das fases, o resultado é considerado positivo.